熱鹽水試驗正常值
細胞核不溶解、細胞形態清晰為陰性。
熱鹽水試驗臨床意義
異常結果:檢查結果為陽性。在粒細胞系統中,中幼粒細胞以下各階段細胞的大部分,細胞核被溶解而且程度明顯(++-+++)。原始粒細胞的細胞核較少被溶解或不溶解,程度也輕(+-++)。早幼粒細胞細胞核溶解情況介于二者之間。淋巴與單核細胞一般不溶解,偶見輕度溶解(+)。以溶解(+)以上的幼稚細胞>10%為診斷界限。急性粒細胞診斷符合率達78.5%,而急性單核或淋巴細胞均不符合。有助于急性白血病細胞類型的鑒別。但幼稚細胞溶解(+)以下,<10%,不能完全排除急性粒細胞白血病?!?br /> 需要檢查的人群:有貧血、出血、感染、發熱明顯特征的人群。
熱鹽水試驗檢查方法
1. 樣本處理:
a. 組織勻漿:稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內。加入1.0 mL預冷的Lysis Buffer,再加入50ul Reagent A , 0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開的組織,可用雙層紗布過濾。
b. 培養細胞勻漿:消化細胞,PBS洗滌,800*g 5~10 min離心收集細胞。計數。每次提取需要5*107個細胞,加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞,再加入50ul Reagent A,將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內,0℃冰浴研磨細胞20~30次。
2. 將組織或細胞勻漿物轉移到1.5ml離心管中,4℃,700*g 離心5 min。細胞核沉淀在收集管底部,棄上清。加入0.5 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸沉淀;
3. 取另一新離心管內加入0.5 mL Medium Buffer,吸取上一步的重懸液,沿管壁小心地加入到此離心管中,置于Medium Buffer之上,4℃, 700*g 離心5min。將上清轉移到新離心管,細胞核沉淀在管底;
4. 棄上清,在細胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細胞核沉,1000*g 離心10min ,棄上清,得較純的細胞核沉淀;
5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應緩沖液重懸細胞核沉淀,立即使用或-70℃保存。
熱鹽水試驗注意事項
不合宜人群:無。
檢查前禁忌:檢查前一天不吃過于油膩、高蛋白食物,避免大量飲酒。血液中的酒精成分會直接影響檢驗結果。體檢前一天的晚八時以后,應禁食。
檢查時要求:
1. 為保證獲得完整的細胞核,第一是全程低溫操作。第二是快速。第三,在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞是制備細胞核的最關鍵環節。與組織塊相比,培養細胞特別是貼壁培養細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁,因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養細胞。
2. 以離心力g計算正確的離心速度,不同的離心機可據此精確計算離心速度。
3. 進行Western Blot和2D-膠電泳,可直接加入上樣緩沖液裂解細胞核。